2014泰安试验站站长姜世金成果简介
发布时间:2014-10-21  

 

一、泰安试验站站长:姜世金
成果名称:发明专利“一种快速鉴定鸭病毒性肝炎病毒血清型的多重RT-PCR方法”和“一种快速鉴定鸭甲肝病毒血清型的双重RT-PCR方法”
(一)一种快速鉴定鸭病毒性肝炎病毒血清型的多重RT-PCR方法
鸭甲型肝炎病毒(Duck hepatitis A virus, DHAV) 包括三个基因型和血清型:鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)、鸭甲肝病毒2型(DHAV-2)和鸭甲肝病毒3型(DHAV-3),三个血清型之间几乎无交叉保护。近年来,我国鸭病毒性肝炎的病原日趋复杂化,研究表明目前大陆地区未检测到DHAV-2,但普遍存在DHAV-1和DHAV-3的混合感染,给养鸭业生产造成严重的经济损失。本发明建立了一种快速鉴定鸭甲肝病毒血清型的双重RT-PCR方法,通过引物及反应条件的优化,可以在一个PCR反应体系中完成对1型和3型鸭甲肝病毒混合感染的快速诊断及血清型鉴定,具有简单、快速、特异性好、灵敏度高的优点,最低可检测到10pg的组织总RNA和102个拷贝DHAV-1和DHAV-3的病毒RNA。
目前鸭病毒性肝炎的鉴定主要依靠流行病学调查、临床症状和病理变化,但不同鸭甲肝病毒引起的鸭病毒性肝炎在流行病学、临床症状和病理变化方面极为相似,特别是两种或多种病毒混合感染时,依靠上述方法和手段难以确定病毒类型。有效控制鸭病毒性肝炎的关键是要明确鸭肝炎病毒的血清型,因此,加强鸭甲肝病毒不同血清型鉴定技术的研究对预防和控制鸭病毒性肝炎具有重要的现实意义。传统的病毒血清型鉴定需要分离培养获得纯化的病毒,通过单因子血清进行鉴定,这种方法费事费力,对于多重感染的鉴定难以进行。由于不同鸭甲肝病毒的基因型与血清型相对应,因此可以通过基因型的检测来完成对鸭甲肝病毒血清型的鉴定。
本发明所涉及的双重RT-PCR方法自2012年建立以来,已在本实验室实施两年多,涉及临床病例的诊断500余例。由于可以快速完成发病病例的诊断,所以对于发病急、死亡率极高的鸭肝炎的有效治疗赢得了时间,对于我省肉鸭养殖业的健康发展发挥了重要作用。
专利证书请见附件14。
(二)一种快速鉴定鸭甲肝病毒血清型的双重RT-PCR方法
鸭肝炎病毒包括鸭甲肝病毒(Duck hepatitis A virus, DHAV)、鸭星状病毒(Duck astrovirus, DAstV)1型(DAstV-1)和2型(DAstV-2) 3 个不同的血清型,相互之间无抗原交叉性。DHAV又分为三个基因型和血清型:DHAV-1、DHAV-2和DHAV-3,三个血清型之间几乎无交叉保护。近年来,我国鸭病毒性肝炎的病原日趋复杂化,研究表明目前至少存在DHAV-1、DHAV-3 和DAstV-1三种血清型的鸭肝炎病毒,导致许多地区针对某型鸭病毒性肝炎采取主动或被动免疫后仍不能有效控制鸭病毒性肝炎的发生和流行,给养鸭业生产造成严重的经济损失。本发明提供了一种快速鉴定鸭病毒性肝炎病毒血清型的多重RT-PCR方法,本发明设计并筛选了新的特异性引物,优化了反应过程中的各种参数,可以在一个PCR反应体系中完成对DHAV-1,DHAV-3和DAstV-1混合感染的快速诊断及血清型鉴定,具有简单、快速、特异性好、灵敏度高的优点,最低可检测到10pg的组织总RNA和102个拷贝DHAV-1、DHAV-3和DAstV-1的病毒RNA。
本发明所涉及的多重RT-PCR方法自2012年建立以来,已在本实验室实施两年多,涉及临床病例的诊断500余例。由于可以快速完成对鸭肝炎发病病例的诊断,所以对于发病急、死亡率极高的鸭肝炎的有效治疗赢得了时间,对于我省肉鸭养殖业的健康发展发挥了重要作用。
专利证书请见附件15。
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